期刊简介
本刊是昆明医学院主办，云南省教育厅主管的综合性学术期刊，为季刊、国内外公开发行。本刊主要报道我省及我院基础医学、临床医学、药学、预防医学领域的最新研究成果，辟有论著、综述、个案报道、短篇报道及经验交流等栏目，旨在促进医学信息交流，为发展祖国的医药卫生事业服务。
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首页>昆明医科大学学报杂志
- 杂志名称：昆明医科大学学报杂志
- 主管单位：云南省教委
- 主办单位：昆明医学院
- 国际刊号：1003-4706
- 国内刊号：53-1221/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全国优秀科技期刊期刊收录：维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), CA 化学文摘(美), 上海图书馆馆藏, 知网收录(中), 国家图书馆馆藏
PCR-RFLP方法检测PARL基因Leu262Val多态性的实验研究
代莉；李会芳；王玉明；宋滇平
关键词：聚合酶链反应, 限制性片段长度多态性, PARL基因, 实验条件
摘要：目的 探讨聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)检测PARL基因Leu262Val多态性的适实验条件.方法 在PCR实验中,运用降落PCR(touchdown PCR,TD-PCR)方法优化PCR条件;对引物终浓度设定0.8 μmol/L、0.6 μmol/L、0.4 μmol/L和0.32 μmol/L四个浓度梯度进行扩增;通过2%琼脂糖凝胶电泳观察结果.在RFLP实验中,在内切酶量10 U不变的情况下,PCR产物量分别设定为5 μL、10 μL、15 μL;酶切时间分别设定为12 h、8 h、4 h、2 h、1 h酶切,反应完毕后通过2%琼脂糖凝胶电泳观察结果.结果 (1)降落PCR方法能有效降低或避免非特异性扩增;(2)引物浓度为0.4 μmol/L时,PCR产物量高且引物二聚体较少;(3)10 μL的PCR产物进行酶切,电泳结果清晰;(4)在37℃条件下酶切4 h能完全消化一个酶切体系中的PCR产物.结论 PCR实验中,TD- PCR优化了PCR条件,为扩增目的条带提供了快速、特异、可靠的方法,适引物浓度为0.4 μm/L;RFLP实验中,有效酶切方案为20 μL的体系中加10 μL产物和10 U内切酶,37 ℃消化4 h.
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