期刊简介
本刊是昆明医学院主办，云南省教育厅主管的综合性学术期刊，为季刊、国内外公开发行。本刊主要报道我省及我院基础医学、临床医学、药学、预防医学领域的最新研究成果，辟有论著、综述、个案报道、短篇报道及经验交流等栏目，旨在促进医学信息交流，为发展祖国的医药卫生事业服务。
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首页>昆明医科大学学报杂志
- 杂志名称：昆明医科大学学报杂志
- 主管单位：云南省教委
- 主办单位：昆明医学院
- 国际刊号：1003-4706
- 国内刊号：53-1221/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：全国优秀科技期刊期刊收录：维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), CA 化学文摘(美), 上海图书馆馆藏, 知网收录(中), 国家图书馆馆藏
用慢病毒转染技术实现Gnaq基因在SH-SY5Y细胞中持续稳定高表达
陈绍春；邹智荣；李国萍；叶频；范艳；李跃敏
关键词：慢病毒载体, GNAQ基因, SH-SY5Y细胞, 过表达
摘要：目的 探讨用慢病毒转染技术实现Gnaq基因在人神经母细胞瘤株SH-SY5Y中持续稳定高表达的可行性,为深入研究Gnaq在脑衰老及相关疾病中的作用及分子机制奠定基础.方法 通过NCBI网站查询Gnaq的编码序列并设计相应的克隆引物,以高表达Gnaq的HepG2细胞的cDNA为模板,PCR扩增得到带适宜酶切位点的目的基因,将目的基因连接入慢病毒载体PLIG,转染感受态细胞,筛选阳性克隆,测序鉴定后包装慢病毒,转染SH-SY5Y细胞；于转染后24 h、第5代时检测GFP荧光表达率；检测第3代、第5代PLIG-Gnaq-SH-SY5Y细胞内Gnaq的转录水平.结果 荧光检测显示SH-SY5Y细胞的转染效率接近100％,此表达效率可持续至转染后第5代；RT-PCR检测显示转染后第3代、第5代的PLIG-Gnaq-SH-SY5Y细胞内Gnaq呈明显的高转录水平,未明显受冻存的影响.结论 利用慢病毒转染技术实现Gnaq基因在SH-SY5Y细胞内长期稳定高表达具有可行性,可用PLIG-Gnaq-SH-SY5Y作为模型细胞深入研究Gnaq基因在神经细胞中扮演的角色及相关机制.
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